يُعد تفاعل البلمرة المتسلسل من أهم التقنيات الجزيئية المستخدمة في تشخيص الأمراض المعدية، وقد أدى دورًا أساسيًا في الكشف عن فيروس كورونا المسبب لمرض كوفيد-19. ونظرًا إلى أن المادة الوراثية لفيروس SARS-CoV-2 تتكون من الحمض النووي الريبي RNA، فإن تشخيصه يعتمد غالبًا على تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل اللحظي بعد النسخ العكسي، المعروفة اختصارًا باسم RT-qPCR. تبدأ عملية التشخيص بجمع عينة من الجهاز التنفسي للمريض، مثل مسحة الأنف أو البلعوم الأنفي. ثم تُنقل العينة إلى المختبر ضمن ظروف مناسبة للمحافظة على المادة الوراثية للفيروس. بعد ذلك يُستخلص الحمض النووي الريبي الفيروسي من العينة ويُحوّل إلى حمض نووي متمم cDNA بواسطة إنزيم النسخ العكسي. وتُستخدم بادئات ومجسات خاصة للتعرف إلى أجزاء محددة من جينوم الفيروس وتضخيمها. تحدث عملية التضخيم عبر دورات متكررة من التسخين والتبريد داخل جهاز متخصص. ومع زيادة كمية المادة الوراثية المستهدفة يصدر الجهاز إشارة فلورية يمكن قياسها لحظيًا. وتظهر النتيجة الإيجابية عندما تُكتشف الأجزاء الجينية الخاصة بالفيروس ضمن الحدود المعتمدة في الفحص. أما النتيجة السلبية فتعني عدم اكتشاف المادة الوراثية الفيروسية في العينة، لكنها لا تنفي العدوى دائمًا بصورة مطلقة. فقد تظهر نتيجة سلبية كاذبة إذا جُمعت العينة بطريقة غير صحيحة، أو أُخذت في وقت مبكر أو متأخر من العدوى، أو كانت كمية الفيروس منخفضة. كما قد تؤدي أخطاء النقل أو التخزين أو التلوث المختبري إلى التأثير في دقة النتائج. ويُستخدم رقم دورة العتبة Ct للتعبير عن عدد دورات التضخيم اللازمة حتى تصبح الإشارة الفلورية قابلة للكشف. وتشير قيمة Ct المنخفضة عادةً إلى وجود كمية أكبر من المادة الوراثية الفيروسية في العينة، لكنها لا تكفي وحدها لتحديد شدة المرض أو قدرة المريض على نقل العدوى. ويجب تفسير نتيجة الفحص إلى جانب الأعراض السريرية وتاريخ التعرض ووقت جمع العينة. ويتميز فحص RT-qPCR بحساسية ونوعية مرتفعتين عند إجرائه بصورة صحيحة، لذلك عُدّ من الاختبارات المرجعية لتشخيص كوفيد-19. كما ساعد استخدامه على اكتشاف الحالات المصابة وعزلها ومتابعة انتشار العدوى في المجتمع. ويتطلب الفحص مختبرات مجهزة وكوادر مدربة وإجراءات دقيقة لمنع تلوث العينات. وتوجد اختبارات أخرى للكشف عن كوفيد-19، مثل اختبارات المستضد السريعة، لكنها تختلف عن PCR في المبدأ والحساسية والاستخدام. وقد أظهرت جائحة كوفيد-19 أهمية التشخيص الجزيئي في الاستجابة السريعة للأمراض الوبائية. لذلك يمثل تفاعل البلمرة المتسلسل أداة علمية دقيقة أسهمت بفاعلية في تشخيص العدوى ودعم القرارات الطبية والصحية المتعلقة بمكافحة كوفيد-19. جامعة المستقبل الاولى على جامعات العراقية الاهلية